Les lipases sont produites dans plusieurs organes du système digestif, notamment le pancréas, l'intestin grêle et l'estomac. Elles sont sécrétées sous forme de proenzymes inactives et sont activées une fois dans le tractus gastro-intestinal par d'autres enzymes, telles que la trypsine et la colipase. Leur activité principale se déroule dans l'intestin grêle, où elles agissent sur les lipides alimentaires après leur émulsion par les sels biliaires. 

Les lipases pancréatiques et intestinales décomposent les triglycérides en acides gras libres et en glycérol, qui peuvent ensuite être absorbés par les cellules de la paroi intestinale. Les acides gras libres et le glycérol absorbés sont ensuite transportés à travers la circulation sanguine vers les cellules où ils sont utilisés comme source d'énergie ou stockés sous forme de graisse corporelle.